ZEISS Correlative Cryo Workflow
Produit

ZEISS Correlative Cryo Workflow

Préparation de lamelles TEM et imagerie en volume en conditions cryogéniques

ZEISS Correlative Cryo Workflow associe la microscopie électronique à balayage laser à champ large et la microscopie à balayage par faisceau d'ions focalisés dans une procédure transparente et facile à mettre en place. La solution comprend un équipement et un logiciel optimisés pour les besoins des processus cryogéniques corrélatifs : de la localisation des macromolécules fluorescentes à l'imagerie volumique à fort contraste en passant par l'amincissement des lamelles sur grille pour la tomographie cryoélectronique.

  • Processus cryogénique transparent à travers de multiples modalités
  • Imagerie en fluorescence haute résolution
  • Imagerie volumique à fort contraste et reconstitution en 3D
  • Amincissement ciblé des lamelles sur grille pour les applications cryogéniques TEM
  • Utilisation polyvalente pour les applications cryogéniques et à température ambiante

Imagerie d'échantillons proches de leur état d'origine

Grâce à ZEISS Correlative Cryo Workflow, vous maîtrisez la combinaison complexe de plusieurs modalités d'imagerie en conditions cryogéniques.

Un processus simplifié pour vous aider à vous concentrer sur vos recherches

Grâce à ZEISS Correlative Cryo Workflow, vous maîtrisez la combinaison complexe de plusieurs modalités d'imagerie en conditions cryogéniques. La solution de processus associe la microscopie optique et électronique au service de l'imagerie en volume et de la production efficace de lamelles TEM. Des accessoires dédiés simplifient le processus et facilitent le transfert des échantillons cryogéniques d'un microscope à l'autre en toute sécurité. La gestion des données est assurée par ZEN Connect, qui conserve vos données dans leur contexte tout au long du processus. Une gamme d'outils de traitement vous aide à améliorer les résultats de l'imagerie.

Cellules de levure à marquage double (CNM67-tdTomato et NUP-GFP). Image du microscope à balayage laser (à gauche) et image Crossbeam (à droite).
Cellules de levure à marquage double (CNM67-tdTomato et NUP-GFP). Image du microscope à balayage laser (à gauche) et image Crossbeam (à droite). Échantillon avec l'aimable autorisation de M. Pilhofer, ETH, Zurich, Suisse
Échantillon avec l'aimable autorisation de M. Pilhofer, ETH, Zurich, Suisse

Cellules de levure à marquage double (CNM67-tdTomato et NUP-GFP). Image du microscope à balayage laser (à gauche) et image Crossbeam (à droite).

Des composants de qualité supérieure pour une qualité de données sans égale

Grâce à leurs objectifs cryo-compatibles et à la haute sensibilité du détecteur Airyscan, les systèmes de microscope à balayage laser ZEISS détectent les protéines et les structures cellulaires à haute résolution, tandis que l'éclairage à faible phototoxicité et des températures basses constantes empêchent la dévitrification de vos échantillons. ZEISS Crossbeam FIB-SEM vous permet de bénéficier d'une imagerie volumique à fort contraste, sans qu'il soit nécessaire d'appliquer une coloration à base de métaux lourds sur vos échantillons. Les deux modalités fournissent des informations fonctionnelles et structurelles précieuses pour une compréhension approfondie de l'ultrastructure, que vous poursuiviez ou non vos observations au microscope électronique en transmission (TEM).

Légende : Cellules de levure à marquage double (CNM67-tdTomato et NUP-GFP). Image du microscope à balayage laser (à gauche) et image Crossbeam (à droite). Échantillon avec l'aimable autorisation de M. Pilhofer, ETH, Zurich, Suisse

Installation d'imagerie de base avec équipement Cryo

Des solutions polyvalentes pour maintenir la productivité de votre installation d'imagerie

Contrairement aux autres solutions, les microscopes ZEISS impliqués dans le processus sont utiles non seulement pour la microscopie cryogénique, mais aussi pour des applications à température ambiante. Cette spécificité est particulièrement avantageuse lorsque les microscopes ne sont pas utilisés exclusivement pour des expériences cryogéniques. Le passage de l'observation en conditions cryogéniques à l'observation à température ambiante est rapide et ne nécessite aucune expertise technique. Cette flexibilité permet aux utilisateurs de consacrer davantage de temps à leurs expériences. Les systèmes d'imagerie sont donc utilisés plus souvent et le retour sur investissement est plus rapide.

ZEISS Correlative Cryo Workflow en bref

Processus cryogénique corrélatif
Processus cryogénique corrélatif

Avantages

  • Supports HPF avec échantillons vitrifiés
  • Grilles TEM avec échantillons vitrifiés
  • Supports HPF avec échantillons vitrifiés (cliquez pour plus d'informations) ; image reproduite avec l'aimable autorisation de : Anat Akiva et Nico Sommerdijk, Centre médical de l'université Radboud, Pays-Bas

    Supports HPF avec échantillons vitrifiés

    Supports HPF avec échantillons vitrifiés. L'exemple de gauche montre la contamination par la glace et la dévitrification et a été écarté de la poursuite du protocole d'imagerie EM. L'exemple de droite montre des zones contaminées par la glace, mais aussi des zones avec des régions bien vitrifiées (zones translucides).

    Les échantillons ont été inspectés au microscope optique pour détecter les dégradations causées par la glace en utilisant différentes méthodes de contraste (fluorescence, lumière réfléchie).

    L'exemple de gauche montre la contamination par la glace et la dévitrification et a été écarté de la poursuite du protocole d'imagerie EM. L'exemple de droite montre des zones contaminées par la glace, mais aussi des zones avec des régions bien vitrifiées (zones translucides).

    Supports HPF avec échantillons vitrifiés (cliquez pour plus d'informations) ; image reproduite avec l'aimable autorisation de : Anat Akiva et Nico Sommerdijk, Centre médical de l'université Radboud, Pays-Bas

  • Grilles MET avec échantillons vitrifiés

    Grilles MET avec échantillons vitrifiés

    Grilles TEM avec échantillons vitrifiés

    L'image de gauche montre des cristaux de glace sur le dessus d'une grille. Aucune contamination par la glace n'est visible sur la grille TEM de droite.

    Grilles MET avec échantillons vitrifiés (cliquez pour plus d'informations)

Évaluation de la qualité de l'échantillon et prévention de sa dégradation

La perte d'échantillons, la contamination par la glace et la dévitrification sont des problèmes bien connus en cryo-microscopie. ZEISS Correlative Cryo Workflow est conçu pour protéger vos précieux échantillons vitrifiés afin qu'ils ne soient pas endommagés au cours de ce protocole exigeant.

Le kit d'accessoires ZEISS Cryo et les capacités d'imagerie du microscope à balayage laser ZEISS/Airyscan et de ZEISS Crossbeam réduisent le risque de perte ou de destruction de votre échantillon lorsque vous travaillez dans des conditions cryogéniques.

Avant même de gérer votre échantillon dans le processus, la vitrification est déjà un défi en soi. En effet, malgré le développement récent des technologies de vitrification, les échantillons sont encore souvent recouverts d'une épaisse couche de glace. Ils peuvent s'avérer aussi seulement partiellement vitrifiés et présenter des zones de glace non amorphe. Une mauvaise vitrification détruit l'ultrastructure des cellules et des tissus. Ces zones ne peuvent être identifiées que dans un TEM, sauf si votre microscope optique ou le FIB-SEM fournit des méthodes d'évaluation des échantillons au début du processus.

Les microscopes à balayage laser ZEISS offrent cette capacité d'évaluation en permettant différentes méthodes de contraste. L'excellente performance de contraste du ZEISS Crossbeam évalue par ailleurs fiablement la qualité de l'échantillon : vous gagnez du temps et améliorez le rendement de vos expériences.

  • Cellules HeLa congelées en plongée (marquées par l'histone 2-GFP) illustrant les conditions idéales pour la poursuite de l'imagerie. La couche de glace a une épaisseur d'environ 6,8 μm et recouvre les cellules vitrifiées. Ces cellules sont parfaitement adaptées à une analyse FIB-SEM plus poussée.

Mesure de l'épaisseur de la glace et ciblage efficace de la région d'intérêt

La mesure de l'épaisseur de la glace est cruciale pour juger de la qualité des échantillons et localiser les cellules d'intérêt dans le spécimen vitrifié. Grâce au microscope optique, votre échantillon est validé facilement. La lumière réfléchie et l'imagerie confocale en fluorescence donnent les premiers indices sur la qualité et favorisent une localisation claire des cellules prometteuses.

Les motifs flous en toile d'araignée du signal fluorescent indiquent souvent une congélation défectueuse. En outre, les échantillons congelés en plongée présentent une qualité de congélation et une conservation inégales dans un même échantillon. Les informations sur l'épaisseur et la qualité de la glace permettent de présélectionner rapidement les cellules avant de passer à l'étape suivante dans le processus cryogénique corrélatif.

Aperçu de la solution

Kit d'accessoires ZEISS Cryo

Kit d'accessoires ZEISS Cryo

Kit d'accessoires ZEISS Cryo

Kit d'accessoires ZEISS Cryo

Kit d'accessoires ZEISS Cryo

ZEISS Correlative Cryo Workflow permet d'utiliser différents porte-échantillons. Que vous utilisiez des grilles TEM, AutoGrid, des disques de saphir ou des planches HPF, vous pouvez compter sur le kit d'accessoires cryogéniques pour faciliter le chargement, le transfert et le stockage de votre échantillon. Un ensemble d'éléments et d'outils garantit une manipulation sûre des échantillons tout au long du processus. Les composants sont compatibles avec :

  • Platine de microscopie corrélative Linkam CMS196V³
  • Système cryogénique Quorum PP3010Z
ZEISS Crossbeam : sous-platine cryogénique rotative

ZEISS Crossbeam : sous-platine cryogénique rotative

ZEISS Crossbeam : Sous-platine cryogénique rotative

ZEISS Crossbeam : sous-platine cryogénique rotative

Transfert aisé et manipulation sûre des échantillons à l'intérieur de ZEISS Crossbeam

ZEISS Correlative Cryo Workflow est livré avec Quorum PP3010Z, un système de préparation cryogénique hautement automatisé, facile à utiliser et refroidi au gaz.

  • La chambre de préparation cryogénique à pompage turbomoléculaire comprend des outils pour la sublimation et le revêtement par pulvérisation cathodique contrôlés et automatiques.
  • Partant de la chambre de préparation cryogénique reliée directement à la chambre de ZEISS Crossbeam, l'échantillon vitrifié est transféré sur une platine froide très stable pour l'imagerie et l'usinage.
  • Le piégeage froid dans la chambre de cryopréparation et la chambre de Crossbeam protège l'échantillon de la contamination par la glace.
  • Le refroidissement continu pendant au moins 24 heures est assuré par le système de refroidissement hors colonne CHE3010.
  • Tous les composants cryogéniques de Quorum sont contrôlés par la station de travail Prepdek®, y compris le tube de stockage sous vide pour le dispositif de transfert cryo et le prep slusher du TEM pour la station de chargement ZEISS.

Les modalités d'imagerie les plus fiables combinées

  • Microscopie cryogénique à champ large et microscopie confocale combinées à l'imagerie volumique par MEB cryogénique et à la préparation de lamelles par MET

Microscopie confocale et à champ large cryogénique

ZEISS Axio Imager, le microscope optique de choix pour ZEISS Correlative Cryo Workflow, peut être équipé de la platine cryogénique CMS196V3 de Linkam. En fonction de vos besoins, configurez Axio Imager comme un système à champ large (avec Apotome 3 pour acquérir des ensembles de données 3D) et un LSM 900/980 avec Airyscan 2 pour l'imagerie confocale haute résolution.

Le microscope à balayage laser et le microscope à grand champ sont des outils polyvalents qui peuvent être convertis rapidement pour les expériences cryogéniques ou à température ambiante, sans pour autant compromettre la qualité de l'image.

Imagerie en volume par MEB cryogénique et préparation de lamelles TEM

ZEISS Crossbeam vise à vous offrir une grande facilité d'utilisation et un excellent contraste d'image. Même avec des échantillons vitrifiés non colorés, ce FIB-SEM génère des images très contrastées à des températures cryogéniques. Il permet d'étudier l'ultrastructure des cellules et tissus, et de rendre les compartiments cellulaires clairement visibles. ZEISS Crossbeam permet également d'observer la procédure d'imagerie et d'usinage en temps réel : vous pouvez contrôler précisément le processus d'usinage et assurer un amincissement ciblé des lamelles TEM ultrafines sur grille.

ZEISS Crossbeam est un outil polyvalent qui n'appelle aucun compromis en matière de performance.

Ensemble de données cryogéniques corrélatives dans ZEISS ZEN Connect

Ensemble de données cryogéniques corrélatives dans ZEISS ZEN Connect

Ensemble de données cryogéniques corrélatives dans ZEISS ZEN Connect

Ensemble de données cryogéniques corrélatives dans ZEISS ZEN Connect

Regrouper tous les éléments : Un logiciel sur mesure

Afin de garantir un processus cryogénique corrélatif fluide et un fonctionnement transparent entre les différents composants, les plateformes logicielles concernées ont été élargies pour inclure des fonctions spécifiques à la microscopie cryogénique. Des modules logiciels supplémentaires ont été développés pour relever les défis posés par la microscopie cryogénique corrélative.

  • ZEN
  • Boîte à outils ZEN Connect
  • Boîte à outils de traitement ZEN EM
  • SmartSEM et SmartFIB
  • Réduction de la dérive cryogénique

Applications

ZEISS Correlative Cryo Workflow en action

  • Ensemble de données de module laser et EM : de l'aperçu en grille à l'identification de la région d'intérêt pour la poursuite de la tomographie TEM
  • Image FIB de la lamelle préparée ; épaisseur de la lamelle : 230 nm
  • Tomogramme segmenté et reconstitué
  • Ensemble de données de module laser et EM : de l'aperçu en grille à l'identification de la région d'intérêt pour la poursuite de la tomographie MET
  • Image FIB de la lamelle préparée ; épaisseur de la lamelle : 230 nm
    Image FIB de la lamelle préparée ; épaisseur de la lamelle : 230 nm

    Image FIB de la lamelle préparée ; épaisseur de la lamelle : 230 nm

    Image FIB de la lamelle préparée ; épaisseur de la lamelle : 230 nm

  • Tomogramme segmenté et reconstitué

Biologie cellulaire

Identification d'événements rares

Les corps polaires du fuseau sont difficiles à localiser dans les cellules de levure. Il s'agit de petites structures qui se produisent rarement. ZEISS Correlative Cryo Workflow vous permet de les identifier et d'en capturer des images précises pratiquement dans leur état d'origine. Le microscope à balayage laser, avec le détecteur Airyscan, facilite encore davantage l'identification de ces structures, permettant d'obtenir des images plus détaillées. Toutes les images, depuis une large vue d'ensemble de la cellule entière jusqu'aux images haute résolution de ces minuscules structures, sont organisées dans un projet ZEN Connect, contenant toutes les données nécessaires pour relocaliser ces structures cellulaires dans le FIB-SEM.

En utilisant Crossbeam, les lamelles TEM des régions identifiées peuvent être préparées pour la tomographie électronique cryogénique. L'imagerie en volume est également possible. De plus, la solution de processus vous permet de reconnecter toutes les données après l'acquisition d'images. Les images provenant de Crossbeam ou les tomogrammes du TEM peuvent être combinés avec les données du microscope à balayage laser et représentés dans un contexte tridimensionnel.

Cellules de levure marquées avec NUP (complexe de pores nucléaires)-GFP et CNM67-tdTomato.
Échantillon et tomogramme avec l'aimable autorisation de M. Pilhofer, ETH Zürich, Suisse

  • Superposition d'une image microscope à balayage laser/Airyscan haute résolution avec une image Crossbeam très contrastée acquise en conditions cryogéniques. La superposition a été réalisée avec ZEN Connect.
  • Reconstitution en volume 3D des cellules de levure et de la segmentation du noyau (bleu foncé) ainsi que de plusieurs mitochondries.
  • Superposition d'une image microscope à balayage laser/Airyscan haute résolution avec une image Crossbeam très contrastée acquise en conditions cryogéniques. La superposition a été réalisée avec ZEN Connect.
  • Reconstitution en volume 3D des cellules de levure et de la segmentation du noyau (bleu foncé) ainsi que de plusieurs mitochondries.

Biologie cellulaire

Imagerie volumique 3D corrélative

Une fois les structures cellulaires, tels les corps polaires du fuseau, identifiées dans le système du microscope à balayage laser, la qualité d'imagerie supérieure de ZEISS Crossbeam cible et analyse l'ultrastructure à l'aide de l'imagerie volumique cryogénique. Même avec de faibles tensions d'accélération, Crossbeam livre une imagerie à fort contraste des échantillons vitrifiés et non colorés en protégeant l'échantillon contre les risques de dégradation. L'acquisition haute résolution avec le microscope à balayage laser et les images à fort contraste du Crossbeam permettent une superposition simple et précise des images. Lorsque la région d'intérêt est relocalisée dans Crossbeam à l'aide de ZEN Connect, l'acquisition d'ensembles de données en 3D des cellules identifiées est terminée. Deux corps polaires du fuseau ont été ciblés dans le volume corrélatif. L'orientation des microtubules individuels devient clairement visible sur les images à fort contraste, selon la direction de coupe du FIB. D'autres compartiments cellulaires ont pu être identifiés dans le volume en 3D.

Échantillon avec l'aimable autorisation de M. Pilhofer, ETH, Zurich, Suisse

Corps polaire du fuseau en coupe longitudinale à l'intérieur de la membrane nucléaire (en haut) et microtubules en coupe transversale à l'extérieur de la membrane nucléaire (en bas). Taille d'incrément de l'image de la pile acquise : 50 nm
Corps polaire du fuseau en coupe longitudinale à l'intérieur de la membrane nucléaire (en haut) et microtubules en coupe transversale à l'extérieur de la membrane nucléaire (en bas). Taille d'incrément de l'image de la pile acquise : 50 nm

Corps polaire du fuseau en coupe longitudinale à l'intérieur de la membrane nucléaire (en haut) et microtubules en coupe transversale à l'extérieur de la membrane nucléaire (en bas). Taille d'incrément de l'image de la pile acquise : 50 nm

Corps polaire du fuseau en coupe longitudinale à l'intérieur de la membrane nucléaire (en haut) et microtubules en coupe transversale à l'extérieur de la membrane nucléaire (en bas). Taille d'incrément de l'image de la pile acquise : 50 nm

  • Cellules d'adénocarcinome congelées en plongée et cultivées sur des disques de saphir.
  • Ensemble de données 3D d'une cellule d'adénocarcinome montrant un schéma prononcé de fission mitochondriale.
  • Réseau auto-segmenté de mitochondries dans un sous-volume d'un ensemble de données Crossbeam.
  • Cellules d'adénocarcinome congelées en plongée et cultivées sur des disques de saphir.
    Cellules d'adénocarcinome congelées en plongée et cultivées sur des disques de saphir.

    Cellules d'adénocarcinome congelées en plongée et cultivées sur des disques de saphir.

    Cellules d'adénocarcinome congelées en plongée et cultivées sur des disques de saphir.

  • Ensemble de données 3D d'une cellule d'adénocarcinome montrant un schéma prononcé de fission mitochondriale.
    Ensemble de données 3D d'une cellule d'adénocarcinome montrant un schéma prononcé de fission mitochondriale.

    Ensemble de données 3D d'une cellule d'adénocarcinome montrant un schéma prononcé de fission mitochondriale.

    Ensemble de données 3D d'une cellule d'adénocarcinome montrant un schéma prononcé de fission mitochondriale.

  • Réseau auto-segmenté de mitochondries dans un sous-volume d'un ensemble de données Crossbeam.

Recherche sur le cancer

Les cellules cancéreuses présentent un fort phénotype de fission mitochondriale qui explique potentiellement leur résistance aux médicaments. Les méthodes de fixation chimique créent souvent des artéfacts, tels que l'accumulation de mitochondries, qui pourraient être interprétés par erreur comme des événements de fission. La fixation par cryogénie évite ces artéfacts et préserve les échantillons dans un état proche de leur état d'origine.

L'exemple montre des cellules d'adénocarcinome gelées en plongée et placées sur des disques de saphir. Les données du microscope à balayage laser mettent déjà en évidence un réseau mitochondrial dense avec une fission accrue, confirmée ensuite par les données de Crossbeam. Après l'imagerie avec le microscope à balayage laser et l'Airyscan, l'échantillon vitrifié a été transféré sur Crossbeam. ZEN Connect a été utilisé pour localiser les régions d'intérêt, pour superposer les ensembles de données respectifs après l'acquisition, et pour organiser toutes les images acquises.

  • Les stomates et les plastides internalisés ont été identifiés avec un microscope à balayage laser grâce à l'autofluorescence de l'échantillon. La stomie sélectionnée a été relocalisée et imagée avec Crossbeam.
  • Les stromules sont clairement visibles dans les plans de coupe acquis avec Crossbeam.
  • La reconstitution 3D et la segmentation de la pile d'images du FIB révèlent la morphologie des plastides. La reconstitution montre des stromules en interaction étroite avec les mitochondries.
  • Les stomates et les plastides internalisés ont été identifiés avec un microscope à balayage laser grâce à l'autofluorescence de l'échantillon. La stomie sélectionnée a été relocalisée et imagée avec Crossbeam.
    Les stomates et les plastides internalisés ont été identifiés avec un microscope à balayage laser grâce à l'autofluorescence de l'échantillon. La stomie sélectionnée a été relocalisée et imagée avec Crossbeam.

    Les stomates et les plastides internalisés ont été identifiés avec un microscope à balayage laser grâce à l'autofluorescence de l'échantillon. La stomie sélectionnée a été relocalisée et imagée avec Crossbeam.

    Les stomates et les plastides internalisés ont été identifiés avec un microscope à balayage laser grâce à l'autofluorescence de l'échantillon. La stomie sélectionnée a été relocalisée et imagée avec Crossbeam.

  • Les stromules sont clairement visibles dans les plans de coupe acquis avec Crossbeam.
    Les stromules sont clairement visibles dans les plans de coupe acquis avec Crossbeam.

    Les stromules sont clairement visibles dans les plans de coupe acquis avec Crossbeam.

    Les stromules sont clairement visibles dans les plans de coupe acquis avec Crossbeam.

  • La reconstitution 3D et la segmentation de la pile d'images FIB révèlent la morphologie des plastides. La reconstitution montre des stromules en interaction étroite avec les mitochondries.

Biologie végétale

La réponse des plantes face aux changements environnementaux, comme l'augmentation de la salinité, est un sujet de recherche important en biologie végétale. Les plantes présentent souvent des réactions de stress face à ces conditions changeantes. L'un des effets observables au niveau de l'ultrastructure est la formation de stromules, de longues extensions tubulaires dans les plastides.

Le projet ZEN Connect montre des images issues de différentes modalités d'imagerie : le microscope à balayage laser a été utilisé pour localiser les stomates et les plastides internalisés à l'aide de l'autofluorescence de l'échantillon. Après une relocalisation réussie de la région d'intérêt, l'image du microscope à balayage laser a été superposée à une image d'ensemble MEB de la stomie sélectionnée. Une pile d'images FIB de la stomie a été acquise. L'ensemble de données EM a révélé une augmentation de la formation de stromules dans les plastides.

Avec l'aimable autorisation de : B. Franzisky, Université d'Hohenheim, Allemagne

  • En haut : Une image du ver a été capturée à température cryogénique avec un système de microscope à balayage laser / Airyscan avant la substitution du gel. En bas : Une image du ver incrusté et coloré a ensuite été capturée avec Crossbeam.
  • Reconstitution de structures cellulaires, telles qu'un autophagosome (AP) ou le génome en différentes phases mitotiques (*cellule en métaphase, #cellule en télophase).
  • Reconstitution en 3D de structures cellulaires
  • En haut : une image du ver a été capturée à température cryogénique avec un système de microscope à balayage laser / Airyscan avant la substitution du gel. En bas : une image du ver incrusté et coloré a ensuite été capturée avec Crossbeam.
    En haut : une image du ver a été capturée à température cryogénique avec un système de microscope à balayage laser / Airyscan avant la substitution du gel. En bas : une image du ver incrusté et coloré a ensuite été capturée avec Crossbeam.

    En haut : une image du ver a été capturée à température cryogénique avec un système de microscope à balayage laser / Airyscan avant la substitution du gel. En bas : une image du ver incrusté et coloré a ensuite été capturée avec Crossbeam.

    En haut : une image du ver a été capturée à température cryogénique avec un système de microscope à balayage laser / Airyscan avant la substitution du gel. En bas : une image du ver incrusté et coloré a ensuite été capturée avec Crossbeam.

  • Reconstitution de structures cellulaires, telles qu'un autophagosome (AP) ou le génome en différentes phases mitotiques (*cellule en métaphase, #cellule en télophase).
    Reconstitution de structures cellulaires, telles qu'un autophagosome (AP) ou le génome en différentes phases mitotiques (*cellule en métaphase, #cellule en télophase).

    Reconstitution de structures cellulaires, telles qu'un autophagosome (AP) ou le génome en différentes phases mitotiques (*cellule en métaphase, #cellule en télophase).

    Reconstitution de structures cellulaires, telles qu'un autophagosome (AP) ou le génome en différentes phases mitotiques (*cellule en métaphase, #cellule en télophase).

  • Reconstitution en 3D de structures cellulaires

Biologie du développement

Étude des cellules mitotiques chez les C. Elegans

Des vers caenorhabditis elegans entiers ont été fixés par HPF et des images des cellules embryonnaires en métaphase ont été capturées in situ par microscopie de fluorescence cryogénique. Les vers sélectionnés ont ensuite été colorés au métal lourd par substitution de gel, encapsulés dans de la résine et sectionnés afin que le même volume puisse être localisé et saisi en image haute résolution, avec un contraste élevé, par Crossbeam. Ce processus a permis de reconstituer la métaphase ciblée avec succès. En outre, cette approche a entraîné des découvertes fortuites : un signal de fluorescence adjacent ponctuel et intrigant a pu être corrélé à un autophagosome présumé.

Ainsi, la microscopie à cryofluorescence d'échantillons épais, congelés sous haute pression, peut piéger et imager des structures cellulaires transitoires dans un état proche de leur état natif. Un traitement approprié suivi par une imagerie EM en volume corrélative permettent ensuite de reconstituer ces architectures ciblées à haute résolution et en 3D.

Avec l'aimable autorisation de Kedar Narayan, Institut national du cancer / NIH et Laboratoire national de recherche sur le cancer, Frederick, États-Unis

Téléchargements

    • ZEISS Correlative Cryo Workflow

      Your Solution for TEM Lamella Preparation and Volume Imaging under Cryogenic Conditions

      Pages: 31
      Taille du fichier: 7 MB

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