ZEISS Apotome 3
Sectionnement optique en imagerie de fluorescence pour votre microscope à champ large
Créez des sectionnements optiques de vos échantillons fluorescents. L'éclairage structuré supprime en toute simplicité la lumière hors-foyer pour que vous puissiez vous concentrer pleinement sur vos recherches. ZEISS Apotome 3 identifie le grossissement et place la grille appropriée dans le trajet du faisceau. Le système calcule ensuite votre sectionnement optique à partir d'un nombre d'images avec des positions de grille différentes. Cette méthode est totalement fiable pour supprimer la lumière diffusée hors-foyer, même dans les spécimens plus épais. De plus, votre système conserve sa facilité d'utilisation habituelle. Vous obtenez des images à haut contraste dans la meilleure résolution possible : des sections optiques tout simplement exceptionnelles.
- Un sectionnement optique exceptionnel : Apotome 3 est fourni avec trois grilles de géométries différentes pour offrir la meilleure résolution, quelque soit le grossissement que vous choisissez.
- Source de lumière et colorants au choix : Apotome 3 s'adapte aux substances de fluorescence et aux sources de lumière de votre choix. Vous conservez donc une flexibilité maximale lorsque le niveau de complexité et les exigences de vos expériences évoluent.
- Plus d'informations sur la structure : l'intégration d'un algorithme breveté pour l'éclairage structuré améliore la qualité des images créées par déconvolution. Identifiez mieux encore les structures importantes des objets examinés.

Points forts
Un sectionnement optique exceptionnel
L'imagerie de structures, de l'ordre de centaines de micromètres jusqu'au nanomètre, nécessite généralement l'utilisation d'objectifs avec différents grossissements. Apotome 3 est fourni avec trois grilles de géométries différentes pour une résolution optimisée avec chaque objectif. La grille adéquate est sélectionnée automatiquement pour obtenir sans faille des sections optiques à haut contraste et pour que vous puissiez vous concentrer à 100 % sur votre expérience. Apotome 3 accroît significativement la résolution axiale par rapport à la microscopie à fluorescence conventionnelle : obtenez des sections optiques exceptionnelles qui permettent un rendu 3D, même à partir d'échantillons épais.
Source de lumière et colorants au choix
Le niveau de complexité et d'exigence de vos expériences évolue au fil de votre progression. Votre équipement doit donc être à la fois performant et flexible. Apotome 3 s'utilise avec des lampes conventionnelles aux halogénures métalliques, des LED économiques à lumière blanche ou le système d'éclairage doux et multicolore Colibri. Il suffit de changer de filtre et le système déplace automatiquement la grille dans la position requise. C'est votre décision et non celle de la technologie : que vous travailliez avec DAPI, Alexa488, Rhodamin, Cy5 ou avec des colorants vitaux de type GFP ou mCherry : Apotome 3 s'adapte à vos fluorophores et à votre source de lumière, créant des images nettes et brillantes à la hauteur de vos attentes.
Des informations supplémentaires sur la structure
Un algorithme breveté pour éclairage structuré améliore encore par déconvolution les images que vous créez avec Apotome 3. En conservant l'ensemble des données brutes, le système permet de basculer entre les images grand champ, à sectionnement optique et déconvoluées pour une flexibilité maximale et une meilleure comparabilité. Les algorithmes de déconvolution puissants allient rapidité et simplicité d'utilisation pour une meilleure résolution latérale et axiale de vos images. L'amélioration du contraste, la résolution optique plus élevée et la suppression du bruit vous permettent de mieux reconnaître la structure des objets examinés.
Principe de fonctionnement
Trois grilles pour une épaisseur de section optique optimale
La lumière émise au-delà du plan focal est détectée par la caméra. Le contraste et la résolution sont réduits en fonction de l'épaisseur ou du volume de l'échantillon (Figure A : acquisition d'image avec un éclairage à épifluorescence conventionnel).
Quel que soit le grossissement utilisé, Apotome 3 place automatiquement la grille optimale dans le trajet du faisceau de votre microscope. La réduction de la fluorescence d'arrière-plan indésirable est proportionnelle à l'augmentation de la fréquence de la grille et à l'amincissement des sections optiques. Les informations sur l'image provenant de l'extérieur du plan focal sont supprimées (Figure B, C et D) pour améliorer le contraste et la résolution de la section optique. L'image « low grid » indique l'épaisseur de section optimale pour notre exemple (Figure D). Ces images sont particulièrement adaptées aux analyses en 3D et au traitement de vos données d'image avec un logiciel de rendu.

Mécanisme de balayage
Apotome 3 projette une grille de structure dans le plan focal de votre spécimen, puis la déplace dans différentes positions à l'aide d'un mécanisme de balayage. À chaque position de la grille, Apotome 3 capture automatiquement une image numérique. À l'aide d'un algorithme breveté, le système traite toutes les images en une seule section optique pour obtenir un contraste amélioré et une meilleure résolution. L'image obtenue est dépourvue de quadrillage de structures.
La lumière d'excitation de fluorescence traverse deux plaques de verre dans le curseur Apotome 3. Lorsqu'une structure de grille est appliquée à la première plaque de verre, le motif de grille est « imprimé » dans la lumière d'excitation. Un mécanisme de balayage incline la deuxième plaque de verre et l'image de la grille est décalée latéralement dans le plan focal de l'échantillon.

Applications typiques
Application | Tâche | Fonction de ZEISS Apotome 3 |
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Culture cellulaire |
Imagerie en 2D |
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Imagerie rapide d'une image en 2D |
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Détection fiable du marqueur même avec une forte fluorescence d'arrière-plan |
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Combinaison de plusieurs techniques de contraste |
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Imagerie de cellules vivantes |
Réduction de la phototoxicité |
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Images en time lapse |
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Sectionnements au vibratome, échantillons histologiques |
Imagerie en 3D |
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Modification de l'épaisseur de section optique |
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Profondeur de pénétration |
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Reconstruction 3D |
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Analyse quantitative |
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Montages complets |
Imagerie en 3D |
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Larges zones d'images |
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ZEISS Apotome 3 à l'œuvre
Neurones de drosophile
Génétique moléculaire et du développement, Université de Louvain, Belgique
Neurones de drosophile, bleu : DAPI, jaune : GFP. Objectif : Plan-Apochromat 20x/0,8. Avec l'aimable autorisation de M. Koch, génétique moléculaire et du développement, Université de Louvain, Belgique.

Embryon de drosophile
Institute for Neurobiology, Université de Münster, Allemagne
Embryon de drosophile, vert : HRP, rouge : marqueur glia, pile Z de 100 µm. Avec l'aimable autorisation de C. Klämbt, Institute for Neurobiology, Université de Münster, Allemagne.
Embryon de souris
Centre for Anatomy, Université de Göttingen, Allemagne
Embryon de souris, sectionnement de tissu, vert : GFP, rouge : Cy3. Objectif : Plan-Apochromat 40×/1,3 huile. Avec l'aimable autorisation de N. Büttner et T. Vogel, Centre of Anatomy, Université de Göttingen, Allemagne.
Neurones corticaux
Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne
Comparaison d'une image en champ large et d'un rendu 3D de neurones corticaux colorés pour l'ADN et les microtubules. Avec l'aimable autorisation de L. Behrendt, Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne.


Racine de Lotus Japonicus infectée par des bactéries symbiotiques
Université de Fribourg, Allemagne
Autofluorescence d'une racine de Lotus Japonicus infectée par des bactéries symbiotiques colorées au mCherry. Avec l'aimable autorisation de F. A. Ditengou, Université de Fribourg, Allemagne.



Larves de poisson zèbre transgéniques
Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne
Larves de poisson zèbre transgéniques à 4 jours après la coloration de la fécondation pour : protéine acide fibrillaire gliale, tubuline acétylée, GFP et ADN. Incorporées dans 1,2 % d'agarose à faible point de fusion. Avec l'aimable autorisation de H. Reuter, Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne.






Téléchargements
ZEISS Apotome 3
Optical sectioning in fluorescence imaging for your widefield microscope
Page: 21
Volume de fichier: 3666 kB
ZEISS Apotome 3 - Flyer
Hardware-based, Quantitative Optical Sectioning with Well Documented Algorithms
Page: 6
Volume de fichier: 1176 kB
3D Imaging Systems
Your Guide to the Widest Selection of Optical Sectioning, Electron Microscopy and X-ray Microscopy Techniques.
Page: 68
Volume de fichier: 5952 kB
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