ZEISS Apotome 3

Sectionnement optique en imagerie de fluorescence pour votre microscope à champ large

Créez des sectionnements optiques de vos échantillons fluorescents. L'éclairage structuré supprime en toute simplicité la lumière hors-foyer pour que vous puissiez vous concentrer pleinement sur vos recherches. ZEISS Apotome 3 identifie le grossissement et place la grille appropriée dans le trajet du faisceau. Le système calcule ensuite votre sectionnement optique à partir d'un nombre d'images avec des positions de grille différentes. Cette méthode est totalement fiable pour supprimer la lumière diffusée hors-foyer, même dans les spécimens plus épais. De plus, votre système conserve sa facilité d'utilisation habituelle. Vous obtenez des images à haut contraste dans la meilleure résolution possible : des sections optiques tout simplement exceptionnelles.

  • Un sectionnement optique exceptionnel : Apotome 3 est fourni avec trois grilles de géométries différentes pour offrir la meilleure résolution, quelque soit le grossissement que vous choisissez.

  • Source de lumière et colorants au choix : Apotome 3 s'adapte aux substances de fluorescence et aux sources de lumière de votre choix. Vous conservez donc une flexibilité maximale lorsque le niveau de complexité et les exigences de vos expériences évoluent.
  • Plus d'informations sur la structure : l'intégration d'un algorithme breveté pour l'éclairage structuré améliore la qualité des images créées par déconvolution. Identifiez mieux encore les structures importantes des objets examinés.
ZEISS Apotome 3

Points forts

ZEISS Apotome 3 – Des sectionnements optiques exceptionnelles à tous les grossissements

Un sectionnement optique exceptionnel

ZEISS Apotome 3 – Des sectionnements optiques exceptionnelles à tous les grossissements

L'imagerie de structures, de l'ordre de centaines de micromètres jusqu'au nanomètre, nécessite généralement l'utilisation d'objectifs avec différents grossissements. Apotome 3 est fourni avec trois grilles de géométries différentes pour une résolution optimisée avec chaque objectif. La grille adéquate est sélectionnée automatiquement pour obtenir sans faille des sections optiques à haut contraste et pour que vous puissiez vous concentrer à 100 % sur votre expérience. Apotome 3 accroît significativement la résolution axiale par rapport à la microscopie à fluorescence conventionnelle : obtenez des sections optiques exceptionnelles qui permettent un rendu 3D, même à partir d'échantillons épais.

Source de lumière et colorants au choix

ZEISS Apotome 3 – Source de lumière et colorants au choix

Le niveau de complexité et d'exigence de vos expériences évolue au fil de votre progression. Votre équipement doit donc être à la fois performant et flexible. Apotome 3 s'utilise avec des lampes conventionnelles aux halogénures métalliques, des LED économiques à lumière blanche ou le système d'éclairage doux et multicolore Colibri. Il suffit de changer de filtre et le système déplace automatiquement la grille dans la position requise. C'est votre décision et non celle de la technologie : que vous travailliez avec DAPI, Alexa488, Rhodamin, Cy5 ou avec des colorants vitaux de type GFP ou mCherry : Apotome 3 s'adapte à vos fluorophores et à votre source de lumière, créant des images nettes et brillantes à la hauteur de vos attentes.

ZEISS Apotome 3 – Source de lumière et colorants au choix
ZEISS Apotome 3 – Déconvolution
Avec l'aimable autorisation de L. Behrendt, Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne.

Des informations supplémentaires sur la structure

ZEISS Apotome 3 – Déconvolution
Avec l'aimable autorisation de L. Behrendt, Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne.

Un algorithme breveté pour éclairage structuré améliore encore par déconvolution les images que vous créez avec Apotome 3. En conservant l'ensemble des données brutes, le système permet de basculer entre les images grand champ, à sectionnement optique et déconvoluées pour une flexibilité maximale et une meilleure comparabilité. Les algorithmes de déconvolution puissants allient rapidité et simplicité d'utilisation pour une meilleure résolution latérale et axiale de vos images. L'amélioration du contraste, la résolution optique plus élevée et la suppression du bruit vous permettent de mieux reconnaître la structure des objets examinés.


Principe de fonctionnement

Trois grilles pour une épaisseur de section optique optimale

La lumière émise au-delà du plan focal est détectée par la caméra. Le contraste et la résolution sont réduits en fonction de l'épaisseur ou du volume de l'échantillon (Figure A : acquisition d'image avec un éclairage à épifluorescence conventionnel).

Quel que soit le grossissement utilisé, Apotome 3 place automatiquement la grille optimale dans le trajet du faisceau de votre microscope. La réduction de la fluorescence d'arrière-plan indésirable est proportionnelle à l'augmentation de la fréquence de la grille et à l'amincissement des sections optiques. Les informations sur l'image provenant de l'extérieur du plan focal sont supprimées (Figure B, C et D) pour améliorer le contraste et la résolution de la section optique. L'image « low grid » indique l'épaisseur de section optimale pour notre exemple (Figure D). Ces images sont particulièrement adaptées aux analyses en 3D et au traitement de vos données d'image avec un logiciel de rendu.

ZEISS Apotome 3 – Une épaisseur de section optique optimale
C. elegans, montage complet, vert : GFP, bleu : objectif DAPI : plan-Apochromat 20 ×/0,8 Avec l'aimable autorisation du professeur Schnabel, Université technique de Brunswick, Allemagne.

Mécanisme de balayage

Apotome 3 projette une grille de structure dans le plan focal de votre spécimen, puis la déplace dans différentes positions à l'aide d'un mécanisme de balayage. À chaque position de la grille, Apotome 3 capture automatiquement une image numérique. À l'aide d'un algorithme breveté, le système traite toutes les images en une seule section optique pour obtenir un contraste amélioré et une meilleure résolution. L'image obtenue est dépourvue de quadrillage de structures.

La lumière d'excitation de fluorescence traverse deux plaques de verre dans le curseur Apotome 3. Lorsqu'une structure de grille est appliquée à la première plaque de verre, le motif de grille est « imprimé » dans la lumière d'excitation. Un mécanisme de balayage incline la deuxième plaque de verre et l'image de la grille est décalée latéralement dans le plan focal de l'échantillon.

ZEISS Apotome 3 – Projection de grille
Représentation schématique de la projection de la grille. A : Image à champ large. B - D : Images brutes avec différentes positions de la grille. E : Section optique obtenue à travers l'échantillon. La lumière diffusée hors champ est éliminée efficacement par l'éclairage structuré (flèche).

Applications typiques

Application Tâche Fonction de ZEISS Apotome 3

Culture cellulaire

Imagerie en 2D

  • Images individuelles en 2D

Imagerie rapide d'une image en 2D

  • Sectionnement optique disponible uniquement sur le moniteur

Détection fiable du marqueur même avec une forte fluorescence d'arrière-plan

  • Sélection automatique de la grille pour un contraste optimal avec chaque objectif

Combinaison de plusieurs techniques de contraste

  • Toute combinaison de canaux de fluorescence, champ clair, DIC et contraste de phase
  • Configuration individuelle de chaque canal de fluorescence sous forme de section optique ou d'image à champ large

Imagerie de cellules vivantes

Réduction de la phototoxicité

  • Phototoxicité particulièrement faible en association avec un éclairage LED et des caméras haute sensibilité telles que ZEISS Axiocams

Images en time lapse

  • Selon le temps d'exposition, jusqu'à trois images par seconde
  • Doublement de la fréquence d'image avec le mode « rafale »

Sectionnements au vibratome, échantillons histologiques

Imagerie en 3D

  • Sélection automatique de la grille optimale pour chaque objectif

Modification de l'épaisseur de section optique

  • Sélection libre de la grille en fonction de l'échantillon

Profondeur de pénétration

  • En fonction de la densité optique des tissus

Reconstruction 3D

  • Rendu de la pile d'images à l'aide d'une fonction logicielle intégrée
  • Transfert automatique des paramètres des différents canaux de fluorescence

Analyse quantitative

  • Reproductibilité des mesures de dimensions grâce à l'étalonnage automatique du système

Montages complets

Imagerie en 3D

  • Multicanal, pile Z et Time Lapse, déconvolution, images en mode de données brutes, rendu 3D

Larges zones d'images

  • Acquisition automatique de grandes sections à l'aide de Tiles & Positions

ZEISS Apotome 3 à l'œuvre

Neurones de drosophile

Génétique moléculaire et du développement, Université de Louvain, Belgique

Neurones de drosophile, bleu : DAPI, jaune : GFP. Objectif : Plan-Apochromat 20x/0,8. Avec l'aimable autorisation de M. Koch, génétique moléculaire et du développement, Université de Louvain, Belgique.

ZEISS Apotome 3 : Neurones de drosophile
À gauche : Fluorescence conventionnelle. À droite : ZEISS Apotome 3.

Embryon de drosophile

Institute for Neurobiology, Université de Münster, Allemagne

Embryon de drosophile, vert : HRP, rouge : marqueur glia, pile Z de 100 µm. Avec l'aimable autorisation de C. Klämbt, Institute for Neurobiology, Université de Münster, Allemagne.

 

Embryon de souris

Centre for Anatomy, Université de Göttingen, Allemagne

Embryon de souris, sectionnement de tissu, vert : GFP, rouge : Cy3. Objectif : Plan-Apochromat 40×/1,3 huile. Avec l'aimable autorisation de N. Büttner et T. Vogel, Centre of Anatomy, Université de Göttingen, Allemagne.

 
 
 

Neurones corticaux

Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne

Comparaison d'une image en champ large et d'un rendu 3D de neurones corticaux colorés pour l'ADN et les microtubules. Avec l'aimable autorisation de L. Behrendt, Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne.

Champ large
ZEISS Apotome 3
Champ large
ZEISS Apotome 3

Racine de Lotus Japonicus infectée par des bactéries symbiotiques

Université de Fribourg, Allemagne

Autofluorescence d'une racine de Lotus Japonicus infectée par des bactéries symbiotiques colorées au mCherry. Avec l'aimable autorisation de F. A. Ditengou, Université de Fribourg, Allemagne.

ZEISS Apotome 3 – Racine de Lotus Japonicus | Champ large
Champ large
ZEISS Apotome 3 – Racine de Lotus Japonicus | Apotome 3
Apotome 3
ZEISS Apotome 3 – Racine de Lotus Japonicus | Apotome 3 + Déconvolution
Apotome 3 + Déconvolution

Larves de poisson zèbre transgéniques

Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne

Larves de poisson zèbre transgéniques à 4 jours après la coloration de la fécondation pour : protéine acide fibrillaire gliale, tubuline acétylée, GFP et ADN. Incorporées dans 1,2 % d'agarose à faible point de fusion. Avec l'aimable autorisation de H. Reuter, Leibniz-Institute on Aging – Institut Fritz-Lipmann e.V. (FLI), Allemagne.

ZEISS Apotome 3 – Larves de poisson zèbre transgéniques | Champ large
Champ large
ZEISS Apotome 3 – Détails de larves de poisson zèbre transgéniques | Champ large
Champ large
ZEISS Apotome 3 – Larves de poisson zèbre transgéniques | Apotome 3
Apotome 3
ZEISS Apotome 3 – Détails de larves de poisson zèbre transgéniques | Apotome 3
Apotome 3
ZEISS Apotome 3 – Larves de poisson zèbre transgéniques | Apotome 3 + Déconvolution
Apotome 3 + Déconvolution
ZEISS Apotome 3 – Détails de larves de poisson zèbre transgéniques | Apotome 3 + Déconvolution
Apotome 3 + Déconvolution

Téléchargements

ZEISS Apotome 3

Optical sectioning in fluorescence imaging for your widefield microscope

Page: 21
Volume de fichier: 3666 kB

ZEISS Apotome 3 - Flyer

Hardware-based, Quantitative Optical Sectioning with Well Documented Algorithms

Page: 6
Volume de fichier: 1176 kB

3D Imaging Systems

Your Guide to the Widest Selection of Optical Sectioning, Electron Microscopy and X-ray Microscopy Techniques.

Page: 68
Volume de fichier: 5952 kB

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